Mõtle filtrikuubikust väljapoole
Filtrikomplekte valides uute katsete jaoks pole vaja keskenduda ainult fluorofooride optilistele omadustele. Uusim mikroskoobitehnoloogia on suurendanud kiirust ja kontrasti mitmete filtrite paigutamisvõimalustega, mis ei piirdu enam filtrikuubikuga. Uurime laivälja fluorestsentsi kombineerimise erinevaid võimalusi uusima tehnoloogiaga ning võrdleme filtritüüpe, nende eeliseid ja puudusi. Oluline on mõista erinevate filtrikonfiguratsioonide tähendust. Tabelis toodud näites on esitatud ergastusfiltrid, interferentsfiltrid ehk dikroilised peeglid (dichroic) ja emissioonifiltrid kolmevärvilise katse jaoks, mis hõlmab UV-, sinist ja rohelist ergastust. Filtrite värvid tähistavad valguse lainepikkusi, ühtlased värvid tähistavad üheribalisi filtreid ja poolitatud värvid mitmeribalisi filtreid.
Olulised filtrikonfiguratsioonid
Ühendatud filtrid tagavad suure kontrasti, kuid mitme kanaliga pildistamisel võib filtrirattasse paigutatud filtrikuubik olla aeglane. Mitmeribalised filtrikomplektid vähendavad sekundaarse liikumise viivitust spektri äärealadel. Mehaaniline liikumine aeglustab kanalite vahetamist, piirates ajalist eraldusvõimet ja detailide selgust, eriti kui oodatakse vibratsiooni vaibumist, mida saab rakkude kujutise katsetest välja tuua. Mitmeribaliste filtrite negatiivne külg on ülepleekimise oht, mis võib kontrasti kahjustada. Pinkeli ja Sedati konfiguratsioonid asuvad kiiruse ja kontrasti kompromissi keskel ning on kõige huvitavamad võimalused, kui otsite lahendust mõlema maailma parima kompromissi näol.
LED-id – laia vaatevälja fluorestsentsi tulevik
LED-id on viimase kümnendi jooksul asendanud traditsioonilisi elavhõbeda- ja metallhalogeniidlampe tänu paremale jõudlusele, mugavusele ja keskkonnasõbralikkusele. Need süsteemid pakuvad stabiilset valgustust, täpseid katsetulemusi ning elektroonilisi juhtimisvõimalusi nagu TTL-käivitamine, mis suurendavad ajutist lahutusvõimet, võimaldades tabada kõige dünaamilisemaid sündmusi elusrakkude reaalajas pildistamiseks. Ergastusfiltrite kiire paigutamine võimaldab mitmesuguseid Pinkeli ja Sedati konfiguratsioone, mis väldivad valguse teekonnal latentsust.
Pinkel ja Sedat – millal mida eelistada?
Pinkeli komplekt võib siiski tekitada kompromissi fluorofoori spetsiifilisuses, kuna emissiooniteel on mitmeribaline emissioonifilter, ja sedati konfiguratsioon on eelistatav, kui spetsiifilisus on prioriteet. Nende stsenaariumide puhul võimaldab pildijaoturi lisamine emissioonivalguste teele kasutada Sedati filtrikomplekti, vältides samas mehaanilist liikumist – kuid see nõuab suuremat optilise võimsuse eelarvet.
Multi-Sedat hübriidkomplektid
Mitme-Sedat hübriidkomplektid on ideaalne lahendus laboritele, mis vajavad paindlikkust kiiruse ja spetsiifilisuse vahel vahetamiseks. Komplektis on mitmeribaline ergutus- ja emissioonifilter kiirete rakenduste jaoks ning üheribalised emissioonifiltrid spetsiifilisemate katsete jaoks, mis saab paigutada filtrirattasse ja vastavalt vajadusele valguse teele ette lülitada.
Kiire mitmevärvilise pildi jäädvustamise tulevik
Mikroskoopia ja fluorestsentskujutamise pidevalt arenevas maailmas mängivad filtrikonfiguratsioonid ja valgustustehnoloogia valikud olulist rolli soovitud katsetulemuste saavutamisel. Nii nagu eelnevalt sai mainitud, on filtrite seadistuste maastik laienenud, pannes meid mõtlema tavapärasest filtrikuubist kaugemale. Siiski on oluline arvestada kiiruse ja spetsiifilisuse vahelist kompromissi. Ühekanalilised filtrid paistavad silma spetsiifilisuse poolest, samas kui mitmekanalilised filterkomplektid pakuvad kiirust. Pinkel ja Sedat konfiguratsioonid esindavad tasakaalu, pakkudes nii kiirust kui spetsiifilisust, olles ahvatlev valik teadlastele.
Kokkuvõttes on see suurepärane näide täiendavate tehnoloogiate koostööst, et täiustada elusrakkude kujutamist. Soovitame alati mõelda filtrikonfiguratsioonide suuremale pildile, kui kaalute pildistamisseadmete ja mikroskoopide uuendamist.
Avastage CoolLED valgusallikate ja Chroma filtite maailm juba täna – küsi lisainfot ja leia parimad lahendused oma laborile!
refereeritud Brad Reynolds, Isabel Goodhand PhD artiklist”Setups for High-Speed Multi-color Fluorescence Imaging” aprill 2024